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細菌蛋白抽提試劑盒說明書

更新時間：2020-09-01　點擊量：2401

細菌蛋白抽提試劑盒說明書

Bacterial Protein Extraction Kit

目錄號：K0888

保存條件：Lysozyme、DNaseⅠ、蛋白酶抑制劑混合物-20℃保存，其他組分室溫保存。

組分說明

Cat. No. K0888 K0888A

Size 25 次 100 次

Bacterial Protein Extraction Reagent 25 ml 100 ml

蛋白酶抑制劑混合物 250 μl 1 ml

Lysozyme （50 mg/ml） 50 μl 200 μl

DNaseⅠ（1,000 U/ml） 25 μl 100 μl

產品簡介

　　細菌蛋白抽提試劑使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌表達的重組蛋白及

轉染昆蟲細胞的蛋白提取。提取過程中不需進行超聲破碎，有效避免了外源蛋白的污

染。細菌蛋白抽提試劑盒在抽提試劑的基礎上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制劑混

合物，可提高蛋白提取效率并減輕因DNA引起的粘稠現象，有效避免蛋白降解。所提取

的蛋白保持了生物學活性，可進行IP，Western Blot，蛋白純化等下游操作。

注意事項

1．細菌蛋白抽提試劑適用于從新鮮或凍存細菌中提取蛋白，也適用于從桿狀病毒轉染

的昆蟲細胞中提取蛋白。

2．本品采用Tris緩沖系統，蛋白提取后的純化操作，請使用相同的緩沖系統。

3．使用本產品獲得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法進行蛋白定量。

4．使用本產品從一系列常見的宿主菌中抽提可溶性蛋白，均有較好的提取效果。對于

特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰凍細胞。

5．根據具體情況，可在本產品中加入蛋白酶抑制劑、鹽、螯合劑、還原劑。

本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

操作步驟

● 昆蟲細胞蛋白提取

1．低速離心收集細胞。

2．稱量細胞濕重，按10 ml/g的量加入細菌蛋白抽提試劑。

3．重懸后，冰上孵育20分鐘（冰上放置時間應根據細胞類型不同進行調整）。

4．15,000×g離心15分鐘，分離可溶性蛋白。

● 細菌可溶性蛋白提取

1．5,000×g離心10分鐘，收集菌體。

2．可選步驟：每1 ml 細菌抽提試劑中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、2 μl Lysozyme

（50 mg/ml）和10 μl蛋白酶抑制劑混合物，渦旋震蕩混勻。

3．按照每克菌體沉淀加入20 ml細菌蛋白抽提試劑的比例，即按照1:20的比例，向菌體沉淀中加入抽提液，充分渦旋或用移液器上下吹打直至菌體*重懸。

4．重懸后，室溫孵育10-15分鐘（放置時間應根據細胞類型不同進行調整）。

5．15,000×g離心5分鐘。

6．轉移上清至新的離心管中（上清中即為可溶性蛋白），進行蛋白定量及下游實驗。

注意：如過表達的大部分蛋白仍在沉淀中，目的蛋白可能以包涵體形式存在，可使用包涵體蛋白溶解液（K0007）進行溶解或優化表達條件增加可溶性蛋白的表達。

常見問題：

1. 目的蛋白不溶

可能原因：目的蛋白表達為包涵體

解決方法：優化表達條件或使用包涵體蛋白溶解液,在蛋白抽提試劑中加入Lysozyme 和 DNase I

2. 加入Lysozyme 后目的蛋白仍沒有提取出來

可能原因:溫度過低,Lysozyme活性降低或失活

解決方法：將使用試劑恢復至室溫,加入更多的Lysozyme或更換新的酶

3. 提取物粘度高

可能原因：DNase I 活性降低或失活

解決方法：a加入更多的DNase I 或更換新的DNase I

b將鎂離子的終濃度增加至2mM

4. 蛋白抽提后仍有大部分蛋白存在于沉淀中

可能原因：蛋白量過大

解決方法：加入Lysozyme及DNase I

5. 蛋白抽提試劑有沉底析出

可能原因：溫度過低

解決方法：將蛋白抽提試劑恢復至室溫

實驗代做服務：

ELISA試劑盒免費代檢測	CCK8檢測	HE染色	蛋白相互作用分析
Western Blot	免疫組化IHC染色	熒光定量PCR	動物模型服務
流式細胞檢測	免疫熒光染色	激光共聚焦	DNA甲基化實驗
石蠟/冰凍切片	透射電鏡服務	掃描電鏡實驗	蛋白雙向(2-D)
動物實驗	免疫共沉淀	原位雜交（FIsh）	蛋白質純化
分子克隆和質粒載體構建服務	組蛋白甲基化磷酸化乙酰化	蛋白雙向2D-WB	藥理毒理動物實驗
番紅O固綠染色	明膠酶譜MMP	酶活性檢測	動物造模/模型實驗服務

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